什么是 “HPLC grade”？
“HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) grade”高效液相色譜通常指為高效液相色譜專門優(yōu)化并按色譜指標(biāo)檢驗(yàn)的溶劑（及相關(guān)試劑）。其核心目標(biāo)是在等度或梯度洗脫條件下，不引入會(huì)影響檢測(cè)基線與分離的雜質(zhì)（例如紫外/熒光活性雜質(zhì)、可蒸發(fā)與不可蒸發(fā)殘留、顆粒等）。
HPLC技術(shù)于1970年代興起（“HPLC”一詞由Csaba Horváth教授提出），隨之儀器與試劑供應(yīng)商推出了面向色譜的專用級(jí)別（如“isocratic等度洗脫級(jí)/gradient梯度洗脫級(jí)”等）。HPLC grade并非由某一國(guó)際監(jiān)管/學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)統(tǒng)一定義，而是供應(yīng)商自定并公示規(guī)格。
色譜中常用UV/熒光檢測(cè)與梯度洗脫，溶劑若含有UV/熒光活性雜質(zhì)或顆粒，會(huì)導(dǎo)致噪聲、漂移、鬼峰、甚至堵塞。因此業(yè)界形成了以“基線干凈、批間一致、保護(hù)系統(tǒng)與色譜柱”為目標(biāo)的HPLC級(jí)溶劑規(guī)范與適用性檢測(cè)。與“純度含量”不同，HPLC級(jí)更強(qiáng)調(diào)“在色譜系統(tǒng)與檢測(cè)器條件下的行為表現(xiàn)”，比如UV吸收、熒光本底、梯度基線平穩(wěn)性與顆粒控制等。廠商常把水、乙腈、甲醇、異丙醇、己烷、THF等做成HPLC等度級(jí)或梯度級(jí)產(chǎn)品，并給出適用性測(cè)試。
HPLC級(jí)的核心“專長(zhǎng)”與亮點(diǎn)
· 低UV吸收 & 低熒光本底：降低背景與假信號(hào)，尤其在200–400nm關(guān)鍵波段做梯度UV監(jiān)測(cè)時(shí)。
· 梯度適用性（Gradient suitability）：以“水/有機(jī)相”梯度進(jìn)行空白運(yùn)行，考查基線平穩(wěn)與可重復(fù)性。
· 微粒控制（通常0.2µm微濾）：減少泵/閥/色譜柱/流通池?fù)p傷與堵塞。
· 低蒸發(fā)殘?jiān)∟on-volatile residue, NVR）：蒸發(fā)后殘留低，避免污染與堵塞。
· 關(guān)鍵理化指標(biāo)受控：含水量（KF）、酸/堿度（µeq/g）、顏色（APHA）、過氧化物（對(duì)醚類溶劑）等。
· 批間一致：減少方法學(xué)重驗(yàn)證帶來的時(shí)間與成本。
常見實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目（HPLC級(jí)溶劑）
· UV吸光度（典型在190–280nm多個(gè)固定波長(zhǎng)，如200/220/254/280nm處測(cè)得）與梯度基線測(cè)試（水/有機(jī)相）。
· 熒光（以奎寧當(dāng)量計(jì)，常在254/365nm）。
· 殘?jiān)∟VR/Residue on evaporation）。
· 水分（Karl Fischer）。
· 酸度/堿度（µeq/g）。
· 顏色（APHA）。
· 顆粒/微濾孔徑（常 0.2 µm）。
· 過氧化物/穩(wěn)定劑（如THF的BHT）。
與相關(guān)等級(jí)的對(duì)比
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等級(jí)
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誰來定義
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關(guān)注點(diǎn)
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能否直接替代 HPLC 級(jí)
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HPLC grade（等度/梯度）
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供應(yīng)商定義并公示（色譜適用性測(cè)試）
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低UV/熒光背景、0.2µm微濾、NVR、KF、梯度基線
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——
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LC-MS/UHPLC-MS級(jí)
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供應(yīng)商定義（含 MS兼容性測(cè)試、低TOC/低金屬/少加合物）
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對(duì)MS更友好（更低雜質(zhì)與聚醚/增塑劑），多為0.2µm微濾
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可下兼容HPLC，但價(jià)格更高。
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Spectrophotometric（光譜級(jí)）
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供應(yīng)商定義+常見遵循 Ph.Eur/ACS的光譜透過率限
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極低UV吸收，用于UV/Vis；不總是進(jìn)行梯度基線/顆粒測(cè)試
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某些場(chǎng)景可用，但不等同于HPLC梯度級(jí)。
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ACS/AR/GR等“化學(xué)純/分析純”
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ACS等機(jī)構(gòu)有統(tǒng)一方法與指標(biāo)
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化學(xué)雜質(zhì)總量與種類；不保證色譜基線與微粒
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不建議用于HPLC（尤其梯度/低波長(zhǎng)UV）。
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GC級(jí)
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供應(yīng)商定義（強(qiáng)調(diào)揮發(fā)性/低非揮發(fā)殘留）
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面向氣相色譜的揮發(fā)性與殘留控制
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對(duì)HPLC-UV的UV/熒光本底未必達(dá)標(biāo)。
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典型溶劑的UV截止（用于選擇檢測(cè)波長(zhǎng)的常識(shí)表）
下表為近似/典型值（Approx.），單位nm，按1cm光程定義。實(shí)際以供應(yīng)商COA/手冊(cè)為準(zhǔn)。
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溶劑
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UV截止λc（近似）
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備注（原因/注意）
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乙腈 (ACN)
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~190
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低截止、透光好，是RP-HPLC最常用有機(jī)相之一。
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甲醇 (MeOH)
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~205
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常用改性劑；低波段（≤210nm）背景比ACN略高。
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異丙醇 (IPA)
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~205
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與水互溶、粘度較高；用于改變選擇性/洗脫強(qiáng)度。
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乙醇 (EtOH)
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~210
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綠色溶劑選項(xiàng)；低波端本底高于ACN。
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正丙醇 (1-PrOH)
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~210
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與水互溶；在方法開發(fā)中偶作選擇性調(diào)節(jié)。
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四氫呋喃 (THF)
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~212–215
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本征截止在~212–215nm，但穩(wěn)定劑/過氧化物可顯著抬高背景；優(yōu) HPLC級(jí)并注意新鮮度/脫氣。
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備注：
- UV截止λc是指某溶劑在1cm光程下、以水作參比時(shí)，吸光度A=1.0AU所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)。低于這個(gè)波長(zhǎng)，溶劑自身吸收太強(qiáng)，不適合用作檢測(cè)波長(zhǎng)。
- λc定義為A(1cm)=1.0AU 的波長(zhǎng)；不同批次/廠商/雜質(zhì)/穩(wěn)定劑/溶解氧/混合比例會(huì)引起偏差；Waters手冊(cè)將其標(biāo)注為approximate。
- HPLC-UV 流通池光程常小于1cm；按Beer–Lambert 定律，較短光程可在稍短波長(zhǎng)獲得同等本底（但仍應(yīng)與實(shí)際基線測(cè)試相結(jié)合）。
如何選擇與注意事項(xiàng)
1. 按檢測(cè)器與波長(zhǎng)優(yōu)先級(jí)選級(jí)別：
- UV/熒光+梯度：首選HPLC梯度級(jí)；低波長(zhǎng)（≤210 nm）尤其要看UV吸收限與梯度基線圖。
- ??LC-MS：優(yōu)先LC-MS/UHPLC-MS級(jí)（低TOC/低金屬/低加合物）。
2. 核對(duì)COA關(guān)鍵指標(biāo)：UV吸光度（多波長(zhǎng)）、熒光、NVR、KF、酸/堿度、微濾孔徑等；對(duì)醚類檢查過氧化物與BHT穩(wěn)定劑。
3. 水的質(zhì)量：反相體系需18MΩ·cm超純水，可顯著降低背景與污染。Waters
4. 過濾與脫氣：移動(dòng)相使用0.2–0.45 µm過濾與在線脫氣/真空超聲/氦氣鼓泡，減少噪聲與塞堵。
5. UHPLC系統(tǒng)用溶劑：多數(shù)廠家建議使用LC-MS/UHPLC-MS級(jí)；至少用HPLC級(jí)。不同廠商建議略有差異（以儀器廠指南為準(zhǔn)）。
6. 溶劑穩(wěn)定性：醚類（如THF）注意過氧化物生成風(fēng)險(xiǎn)；常見含BHT 250–400ppm穩(wěn)定，定期檢測(cè)/更換。
7. 一致性：方法驗(yàn)證后盡量固定品牌與等級(jí)；更換批號(hào)先做空白梯度與系統(tǒng)適用性檢查。
8. 包裝與存儲(chǔ)：優(yōu)選硼硅玻璃瓶以減少金屬離子/增塑劑浸出；避光、密封、標(biāo)記啟封日期。
常見問答（FAQ）
Q：HPLC級(jí) 是否“更高純度”？
不等同。它更強(qiáng)調(diào)色譜適用性（低UV/熒光、顆粒與梯度基線），而不是單一“含量％”。
Q：HPLC級(jí) 能否用于UHPLC？
可作為最低起點(diǎn)，但多數(shù)場(chǎng)景推薦LC-MS/UHPLC級(jí)以獲得更干凈的基線與更少的離子加合物。
Q：為何UV截止重要？
在截止波長(zhǎng)附近測(cè)量會(huì)因溶劑自吸收而增噪，應(yīng)選擇高于截止的工作波長(zhǎng)或改用更合適溶劑。
Q：我看到“鬼峰/起伏基線”，可能原因？
溶劑UV/熒光雜質(zhì)、過氧化物、未充分脫氣、管路/ 閥污染、混用不同品牌梯度級(jí)、在線過濾器堵塞等?？上茸隹瞻滋荻扰c更換新批次/品牌驗(yàn)證。
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